Partículas Lentivirales de Activación (h) Stim1: sc-401311-LAC

El gen humano **STIM1** codifica la molécula 1 de interacción estromal (Stim1), un sensor de Ca²⁺ del retículo endoplásmico que detecta el agotamiento de Ca²⁺ luminal y se acopla a los canales ORAI para desencadenar la entrada de calcio operada por depósitos (SOCE). Este eje de señalización modula la dinámica del Ca²⁺ citosólico, que controla la transcripción dependiente de NFAT, la progresión del ciclo celular, la adaptación metabólica y la remodelación del citoesqueleto. La SOCE dependiente de Stim1 es fundamental para la activación de células inmunitarias y otros procesos regulados por el calcio, y la alteración de la actividad de STIM1 se ha relacionado con disfunción inmunitaria y otras patologías asociadas a una señalización aberrante del calcio. Como regulador proximal de la entrada de Ca²⁺, STIM1 ofrece un punto de entrada mecanístico para analizar vías dependientes de calcio y respuestas al estrés en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Stim1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de STIM1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Stim1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción STIM1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Stim1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo STIM1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.