Stim1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401311-LAC

Das humane Gen **STIM1** kodiert das stromale Interaktionsmolekül 1 (Stim1), einen Ca²⁺-Sensor des endoplasmatischen Retikulums, der eine Abnahme des luminalen Ca²⁺ erkennt und mit ORAI-Kanälen koppelt, um den speichergesteuerten Kalziumeinstrom (store-operated calcium entry, SOCE) auszulösen. Diese Signalachse formt die zytosolische Ca²⁺-Dynamik, die die NFAT-abhängige Transkription, die Zellzyklusprogression, die metabolische Anpassung und den Umbau des Zytoskeletts steuert. Der Stim1-abhängige SOCE ist zentral für die Aktivierung von Immunzellen und weitere kalziumregulierte Prozesse; eine veränderte STIM1-Aktivität wurde mit Immundysfunktionen und anderen Pathologien in Zusammenhang gebracht, die mit aberranter Kalziumsignalgebung einhergehen. Als proximaler Regulator des Ca²⁺-Einstroms bietet STIM1 einen mechanistischen Ansatzpunkt, um kalziumabhängige Signalwege und Stressantworten in menschlichen Zellen zu untersuchen.

Stim1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente STIM1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Stim1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der STIM1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Stim1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen STIM1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.