STC2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405292-ACT

Humanes STC2 (Stanniocalcin 2) kodiert ein sezerniertes glykosyliertes Proteinhormon, das an der Calcium-/Phosphat-Homöostase und der zellulären Anpassung an Stress beteiligt ist. Die STC2-Expression wird durch Hypoxie- und endoplasmatisches-Retikulum-Stress-Signalwege reguliert und mit der Modulation von Proliferation, Apoptose und metabolischem Remodeling über kontextabhängige Signalnetzwerke in Verbindung gebracht. Dysregulierte STC2-Spiegel wurden in verschiedenen Krankheitskontexten beschrieben, darunter in der Krebsbiologie sowie bei kardiometabolischen und entzündlichen Prozessen, wo STC2 häufig als stressresponsiver Mediator untersucht wird. Diese Eigenschaften machen STC2 zu einem nützlichen Ziel, um Signale sezernierter Faktoren, Crosstalk von Stresssignalwegen und Phänotypen zu untersuchen, die mit der Anpassung an die Mikroumgebung verknüpft sind.

STC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STC2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

STC2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STC2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STC2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen STC2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STC2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von STC2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des STC2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STC2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.