Plasmide CRISPR d'Activation (h) ST8Sia III: sc-407120-ACT

ST8SIA3 code pour ST8Sia III, une α2,8‑sialyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui allonge les chaînes d’acide sialique sur les glycoprotéines et les glycolipides afin de générer des glycanes polysialylés. En remodelant la glycosylation de la surface cellulaire et de la matrice extracellulaire, ST8Sia III influence l’organisation membranaire, les interactions des récepteurs et la communication intercellulaire, avec des effets en aval sur les programmes d’adhésion, de migration et de différenciation. Des signatures de sialylation altérées sont fréquemment observées dans le cancer et les dérégulations immunitaires, et l’expression de ST8SIA3 a été associée à des modifications de l’invasivité des cellules tumorales et de leurs phénotypes de signalisation. Ce gène est donc pertinent pour l’étude de la régulation, dépendante de la glycosylation, des voies du développement et des transitions d’état cellulaire associées aux maladies.

ST8Sia III Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ST8SIA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ST8Sia III Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ST8SIA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ST8SIA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ST8Sia III. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ST8SIA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ST8Sia III au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ST8Sia III dans les cellules tumorales présentant une expression de ST8SIA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.