Partículas Lentivirales de Activación (h) SSX5: sc-403552-LAC

SSX5 (sarcoma sinovial, punto de ruptura X 5) codifica un antígeno nuclear de tipo cáncer‑testículo y un regulador transcripcional que puede modular, de manera dependiente del contexto, programas de expresión génica asociados a la cromatina. SSX5 se ha implicado en complejos de represión transcripcional y en estados epigenéticos alterados que influyen en la identidad celular, la diferenciación y la capacidad proliferativa. La expresión aberrante de miembros de la familia SSX se asocia con la biología tumoral y con patrones de expresión restringidos al sistema inmunitario, lo que convierte a SSX5 en un modelo útil para estudiar redes transcripcionales restringidas por linaje. En células humanas, SSX5 se investiga comúnmente por sus contribuciones a la regulación génica desregulada, las interacciones proteína–proteína y los circuitos transcripcionales asociados al cáncer.

Las partículas de activación lentiviral SSX5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SSX5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SSX5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SSX5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SSX5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SSX5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.