Plasmide CRISPR/Cas9 KO SRY (h): sc-404342

Présentation

SRY code le facteur de transcription « sex-determining region Y », une protéine de liaison à l’ADN de type HMG-box qui initie la détermination sexuelle mâle en orientant la différenciation précoce de la gonade bipotente vers le développement testiculaire. En régulant des programmes transcriptionnels dans la gonade bipotente, SRY active des voies en aval, notamment l’activation de SOX9 et de réseaux géniques plus larges qui coordonnent l’engagement de la lignée des cellules de Sertoli et la suppression des signaux favorisant le développement ovarien. Une altération ou une dérégulation de la fonction de SRY est associée à des troubles du développement sexuel, notamment la dysgénésie gonadique 46,XY et des phénotypes d’inversion sexuelle, ce qui en fait une cible majeure pour l’étude du contrôle transcriptionnel des décisions de destin cellulaire au cours du développement. Dans des modèles cellulaires, SRY constitue un nœud expérimental pratique pour analyser la régulation génique dépendante de la chromatine et l’activité de facteurs de transcription spécifiant des lignages.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SRY (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SRY dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SRY, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SRY à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SRY.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SRY pour l'étude de la signalisation de SRY, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SRY essentiels à la fonction de SRY
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SRY pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SRY plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SRY plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SRY. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SRY plasmide HDR (h) et le SRY (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SRY pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SRY définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.