SRp30c CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403790-ACT

SRSF9 kodiert den humanen serin-/argininreichen Spleißfaktor SRp30c, ein RNA-bindendes Protein, das das konstitutive und alternative prä-mRNA-Spleißen reguliert und zur Exon-Definition beiträgt. SRp30c beeinflusst die Ausgabe von Transkript-Isoformen und Entscheidungen der RNA-Prozessierung, die mit der Assemblierung des Spleißosoms, dem mRNA-Export und umfassenderen Genexpressionsprogrammen verknüpft sind. Eine veränderte Aktivität oder Expression von Spleißregulatoren der SR-Familie kann das Isoformengleichgewicht in Netzwerken des Zellzyklus, der Stressantwort und der Differenzierung verschieben und so eine Verbindung zwischen Spleiß-Fehlregulation und krankheitsassoziierten transkriptionellen Zuständen herstellen. Entsprechend wird SRSF9 häufig im Hinblick auf seine Rolle in der posttranskriptionellen Kontrolle und zur Kartierung spleißabhängiger regulatorischer Signalwege in menschlichen Zellen untersucht.

SRp30c Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SRSF9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SRp30c Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SRSF9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SRSF9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SRp30c-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SRSF9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SRp30c-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SRp30c-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SRSF9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.