SRp30c CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403790-ACT

SRSF9は、ヒトのセリン／アルギニンに富むスプライシング因子SRp30cをコードしており、構成的および選択的なpre-mRNAスプライシングを調節し、エクソンの定義（exon definition）に寄与するRNA結合タンパク質です。SRp30cは、スプライソソームの組み立て、mRNAの核外輸送、さらにはより広範な遺伝子発現プログラムと交差するRNAプロセシングの意思決定に関与し、転写産物のアイソフォーム産生に影響を与えます。SRファミリーのスプライシング調節因子の活性や発現が変化すると、細胞周期、ストレス応答、分化ネットワークにわたってアイソフォームのバランスがシフトし、スプライシング異常が疾患関連の転写状態と結び付くことになります。そのためSRSF9は、転写後制御における役割の解明や、ヒト細胞におけるスプライシング依存的な制御経路のマッピングを目的として、広く研究されています。

SRp30c CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SRSF9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SRp30c CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SRSF9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSRSF9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SRp30cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSRSF9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSRp30c依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSRSF9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSRp30c経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。