Plasmide CRISPR d'Activation (h) SR-A: sc-401898-ACT

Le gène humain **MSR1** code le récepteur scavenger de classe A (**SR-A**), un récepteur de reconnaissance de motifs (pattern-recognition receptor) principalement exprimé par les macrophages et d’autres cellules myéloïdes, qui se lie aux lipoprotéines modifiées, aux cellules apoptotiques et à divers ligands microbiens. SR-A contribue à la reconnaissance immunitaire innée et à l’élimination phagocytaire, tout en modulant les réseaux de signalisation inflammatoire, notamment via des interactions avec les voies des récepteurs de type Toll (TLR) et les programmes cytokiniques. Par son rôle dans la capture des LDL oxydées et des débris cellulaires, MSR1 est largement étudié dans le métabolisme des lipides, la biologie des cellules spumeuses (foam cells) et la polarisation des macrophages. Une activité et une expression dérégulées de MSR1 ont été associées à des contextes d’inflammation chronique et à des mécanismes de maladies cardiométaboliques, offrant un point d’entrée moléculaire pour analyser la régulation immunométabolique.

SR-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MSR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SR-A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MSR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MSR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SR-A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MSR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SR-A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SR-A dans les cellules tumorales présentant une expression de MSR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.