SR-7 Double Nickase Plasmid (h): sc-404174-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SR-7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SR-7 Double-Nickase-Plasmid (h) und SR-7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HTR7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SR-7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404174-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SR-7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404174-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **HTR7** kodiert den Serotoninrezeptor 7 (SR-7), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der primär über **Gαs** signalisiert, um die Adenylylcyclase zu aktivieren, **cAMP** zu erhöhen und **PKA/CREB**‑abhängige Transkriptionsprogramme anzustoßen. SR-7 interagiert zudem mit **β‑Arrestin**‑Gerüstproteinen und kann die **ERK/MAPK**‑Signalgebung beeinflussen, wodurch serotonerge Inputs mit Veränderungen der neuronalen Erregbarkeit, der synaptischen Plastizität und der zirkadianen Regulation verknüpft werden. Im zentralen Nervensystem trägt die HTR7‑Aktivität zu neuroentwicklungs- und neurophysiologischen Prozessen bei; eine fehlregulierte serotonerge GPCR‑Signalübertragung wurde mit neuropsychiatrischen sowie schlafbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht. Außerhalb des Gehirns stellt die SR-7‑vermittelte cAMP‑Signalgebung einen gut zugänglichen Ansatz dar, um GPCR‑Desensitivierung, Rezeptor‑Trafficking und Second‑Messenger‑Dynamiken zu untersuchen.
SR-7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HTR7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HTR7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HTR7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HTR7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.