SR-3A Double Nickase Plasmid (h): sc-402999-NIC

HTR3A kodiert den menschlichen 5‑Hydroxytryptamin-(Serotonin-)Rezeptor 3A (SR‑3A), einen ligandenaktivierten Ionenkanal aus der Cys‑Loop‑Rezeptorfamilie, der als Homopentamer oder zusammen mit anderen Untereinheiten heteropentamere 5‑HT3‑Rezeptoren bildet. Nach Bindung von Serotonin vermittelt SR‑3A einen schnellen Kationeneinstrom und reguliert dadurch Membrandepolarisation, calciumabhängige Signalwege und die Freisetzung von Neurotransmittern; so verknüpft er den serotonergen Tonus mit synaptischer Transmission und neuroimmuner Kommunikation. Die Aktivität von HTR3A greift in Signalwege ein, die die neuronale Erregbarkeit steuern, und beeinflusst nachgeschaltete MAPK/ERK‑ sowie cAMP‑responsive Transkriptionsprogramme über Veränderungen der Ionenhomöostase. Eine fehlregulierte 5‑HT3‑Signalübertragung wurde mit neuropsychiatrischen und gastrointestinalen Phänotypen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung von HTR3A in der Biologie der Gehirn‑Darm‑Achse und in stimulusinduzierten zellulären Antworten unterstützt.

SR-3A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HTR3A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HTR3A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HTR3A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HTR3A-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.