Plásmido CRISPR de Activación (h) SR-2B: sc-402574-ACT

El gen humano HTR2B codifica el receptor de serotonina 2B (SR-2B), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, el recambio de fosfatos de inositol, la movilización intracelular de Ca2+ y la actividad de la vía MAPK/ERK dependiente de PKC. SR-2B modula programas transcripcionales vinculados al crecimiento celular, la remodelación de la matriz extracelular y la dinámica del citoesqueleto, integrando señales serotoninérgicas con redes de señalización específicas de cada tejido. Los cambios en la expresión y la señalización de HTR2B se han asociado con la remodelación cardiovascular y la biología valvular, y se ha descrito actividad alterada del receptor en contextos neuropsiquiátricos y fibróticos, lo que respalda estudios mecanísticos de la fisiopatología impulsada por la serotonina. Estas características hacen de SR-2B una diana útil para investigar la transducción de señales de los GPCR, la señalización sesgada del receptor y las respuestas reguladoras de la expresión génica aguas abajo en modelos celulares humanos.

SR-2B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HTR2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SR-2B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HTR2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HTR2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SR-2B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HTR2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SR-2B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SR-2B en células tumorales con expresión de HTR2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.