Plásmido Doble Nickase (h) SR-2A: sc-401532-NIC

HTR2A codifica el receptor de serotonina 2A (SR-2A), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, aumentar la señalización intracelular de Ca²⁺ y estimular cascadas de fosforilación dependientes de PKC. La señalización de SR-2A se interconecta con las vías MAPK/ERK y modula programas de expresión génica que influyen en la excitabilidad neuronal, la plasticidad sináptica y la actividad de los circuitos corticales. En tejidos humanos, la expresión de HTR2A y la señalización del receptor se estudian con frecuencia en el contexto de la neurotransmisión y la regulación de redes neuromoduladoras. En la literatura de investigación, la alteración de la actividad de la vía de SR-2A y la variación regulatoria en HTR2A se han asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y con la variabilidad en la respuesta al tratamiento, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la señalización serotoninérgica.

SR-2A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HTR2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HTR2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HTR2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HTR2A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.