Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
SQSTM1/p62 Double Nickase Plasmid (m): sc-422075-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SQSTM1/p62 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SQSTM1/p62 Double-Nickase-Plasmid (m) und SQSTM1/p62 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sqstm1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SQSTM1/p62: sc-48402
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SQSTM1/p62 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422075-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SQSTM1/p62 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422075-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Sqstm1* kodiert SQSTM1/p62, einen multifunktionalen Adapter, der polyubiquitinierte Fracht über seine UBA-Domäne bindet und sie über ein LIR-Motiv mit LC3-positiven Autophagosomen verknüpft, wodurch selektive Autophagie und Proteostase koordiniert werden. SQSTM1/p62 dient zudem als Gerüstprotein für Signalkomplexe in der KEAP1–NRF2-Antwort auf oxidativen Stress und in der NF-κB-Signalgebung und integriert dabei Signale zur Nährstoffverfügbarkeit und Entzündungsreize. Als stressinduzierbarer Knotenpunkt beeinflusst eine veränderte Regulation von SQSTM1/p62 den Autophagie-Flux, die Beseitigung von Aggregaten und die mitochondriale Qualitätskontrolle – Prozesse, die häufig in Modellen für Neurodegeneration, metabolische Dysfunktion und Tumorbiologie untersucht werden. Seine Funktionen in der Ubiquitin-Signalgebung und in phasenseparierten Proteinassemblies machen es zu einem zentralen Readout in Studien zu proteotoxischem Stress und angeborener Immun-Signalgebung.
SQSTM1/p62 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sqstm1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sqstm1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sqstm1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sqstm1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.