Plásmido Doble Nickase (h) SQSTM1/p62: sc-400099-NIC

SQSTM1 (p62) es una proteína adaptadora multifuncional que conecta la carga poliubiquitinada con los autofagosomas mediante sus regiones asociada a ubiquitina e interaccionante con LC3, coordinando la autofagia selectiva y la proteostasis. También actúa como un centro de señalización en vías que incluyen las respuestas al estrés oxidativo KEAP1–NRF2, la activación de NF-κB y la detección de nutrientes por mTORC1, integrando señales de estrés e inflamación con el control metabólico. A través de estas funciones, SQSTM1 influye en la eliminación de agregados, el control de calidad mitocondrial y las decisiones de supervivencia celular. La biología desregulada de SQSTM1/p62 se estudia con frecuencia en la neurodegeneración, la adaptación de las células cancerosas al estrés y los trastornos inflamatorios en los que la autofagia y la señalización redox están alteradas.

SQSTM1/p62 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SQSTM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SQSTM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SQSTM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SQSTM1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.