SPTLC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402829-ACT

SPTLC1は、セリンとパルミトイルCoAを縮合して3-ケトスフィンガニンを生成する、de novoスフィンゴ脂質生合成の律速酵素であるセリン・パルミトイルトランスフェラーゼの触媒サブユニットをコードします。セラミド、スフィンゴミエリン、複合糖スフィンゴ脂質の産生を制御することで、SPTLC1は膜組成、リピッドラフトを介したシグナル伝達、オートファジー、ならびにER恒常性を含むストレス応答経路に影響を与えます。SPTLC1活性の変化はスフィンゴ脂質プロファイルを撹乱し、神経変性や末梢ニューロパチーの表現型、さらにより広範な代謝調節異常との関連が報告されています。脂質代謝の中枢的な結節点として、SPTLC1は細胞内シグナル、オルガネラ機能、脂質に駆動される炎症プロセスへの影響という観点から広く研究されています。

SPTLC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPTLC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPTLC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPTLC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPTLC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPTLC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPTLC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPTLC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPTLC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPTLC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。