SphK2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417921-ACT

ヒトのSPHK2はスフィンゴシンキナーゼ2（SphK2）をコードしており、スフィンゴシンをリン酸化してスフィンゴシン-1-リン酸（S1P）を産生する脂質キナーゼである。S1Pは多面的なシグナル伝達メディエーターとして、細胞生存、ストレス応答、遊走、炎症シグナル伝達を制御する。SphK2の活性は、アポトーシス促進性のセラミド／スフィンゴシンと生存促進性のS1Pとの間のスフィンゴ脂質レオスタットのバランスに影響し、ミトコンドリア機能、核内シグナル、クロマチン関連プロセスと結び付いている。細胞内S1Pプールとその下流経路（MAPK/ERK、PI3K-AKT、NF-κB関連プログラムなど）を調節することにより、SPHK2は状況依存的な増殖制御および免疫調節に寄与する。SPHK2が関与するスフィンゴ脂質代謝の破綻は、がんの生物学、神経炎症や神経変性に関わる機構、ならびに心代謝ストレス経路と関連付けられており、シグナル伝達と脂質恒常性の機構研究における標的としての有用性を支持している。

SphK2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPHK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SphK2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPHK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPHK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SphK2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPHK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSphK2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPHK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSphK2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。