SphK1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401274-LAC

SPHK1 kodiert die Sphingosinkinase 1 (SphK1), eine zytosolische Lipidkinase, die Sphingosin phosphoryliert und dadurch Sphingosin-1-phosphat (S1P) erzeugt. S1P ist ein bioaktives Signallipid, das Zellüberleben, Proliferation, Motilität und entzündliche Signalübertragung reguliert. Indem SphK1 das Gleichgewicht zwischen Ceramid/Sphingosin/S1P verschiebt, integriert es Stressantworten und metabolische Signale mit dem Umbau von Membranlipiden sowie nachgeschalteter Signalgebung über S1P-Rezeptoren und intrazelluläre Effektoren. Die SPHK1-Aktivität beeinflusst unter anderem PI3K–AKT-, MAPK/ERK- und NF-κB-Signalwege sowie die Zytoskelettdynamik und verknüpft damit den Sphingolipidstoffwechsel mit angiogeneseassoziierten und immunmodulatorischen Prozessen. Eine fehlregulierte SPHK1-Expression oder S1P-Signalgebung wurde mit onkogenen Signalkontexten, Fibrose und chronisch-entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht und macht SPHK1 zu einem nützlichen Ziel, um lipidvermittelte Signaltransduktion und Zellzustandsübergänge zu untersuchen.

SphK1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SPHK1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SphK1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SPHK1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SphK1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SPHK1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.