SPEN Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406083

Visão geral

SPEN (também conhecido como SHARP) codifica um grande correpressor transcricional nuclear ligante de RNA que conecta parceiros de ligação ao DNA específicos de sequência e RNAs longos não codificantes a complexos modificadores de cromatina. Por meio de interações com SMRT/HDAC e repressores relacionados, SPEN contribui para programas de silenciamento transcricional, incluindo a inativação do cromossomo X dependente de XIST, e influencia a expressão gênica específica de linhagem. SPEN também modula saídas transcricionais responsivas a sinais, com conexões relatadas à regulação associada à via Notch e a um controle epigenético mais amplo de vias do desenvolvimento e relacionadas ao sistema imune. A desregulação da função ou da expressão de SPEN tem sido implicada em estados de diferenciação alterados e na reprogramação transcricional observada em múltiplos contextos de doença, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em estudos de regulação gênica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SPEN (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SPEN em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SPEN, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SPEN na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SPEN.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SPEN para a investigação da sinalização de SPEN, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SPEN críticos para a função SPEN
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SPEN para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SPEN Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SPEN Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SPEN. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SPEN Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SPEN (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SPEN para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SPEN definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.