SPAG17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410482

概要

SPAG17は、運動性繊毛および鞭毛の機能を支える軸糸装置（アクソネーマ）の構造的・制御的構成要素である精子関連抗原17（sperm associated antigen 17）をコードします。微小管に基づくプロセスに関与し、上皮表面における細胞運動や液体輸送に必要な、ダイニン駆動の拍動メカニクスに寄与します。ヒトでは、SPAG17の発現変動や機能破綻が、精子形成および精子運動性の異常と関連し、繊毛構造やシグナル伝達の障害を伴う、より広範な繊毛病（ciliopathy）関連表現型にも関係します。繊毛／鞭毛関連タンパク質としてのSPAG17は、細胞骨格の組織化が細胞周期ダイナミクスや組織特異的な分化プログラムとどのように接続しているかを解析するうえでも有用です。

SPAG17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSPAG17遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SPAG17内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SPAG17のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPAG17タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPAG17シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SPAG17欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPAG17の機能に不可欠なSPAG17エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SPAG17ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPAG17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPAG17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SPAG17遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPAG17 HDRプラスミド（h）および SPAG17 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSPAG17ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSPAG17標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。