SPACR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406681

概要

IMPG1 は SPACR をコードしており、SPACR は分泌型の大型プロテオグリカンとして、網膜の視細胞間マトリックス（interphotoreceptor matrix）の主要な構造要素を担っています。SPACR は、視細胞外節と網膜色素上皮の間の接着や間隔（スペーシング）の維持にも寄与します。広範な糖鎖修飾や他の細胞外マトリックス成分との相互作用を通じて、SPACR はマトリックスの組織化、シグナル分子の拡散、そして視細胞の恒常性維持を支えます。IMPG1 の機能破綻は黄斑ジストロフィーなどの遺伝性網膜疾患と関連しており、細胞外マトリックスの健全性や視細胞生存経路の研究における重要性が示されています。網膜に豊富なマトリックスタンパク質として、SPACR は神経上皮において細胞周囲マトリックスが細胞間コミュニケーションやストレス応答をどのように調節するかを調べるためにも用いられています。

SPACR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるIMPG1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、IMPG1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、IMPG1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SPACRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SPACRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、IMPG1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SPACRの機能に不可欠なIMPG1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、IMPG1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SPACR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSPACR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、IMPG1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SPACR HDRプラスミド（h）および SPACR HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIMPG1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIMPG1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。