Sp9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-436278

概要

Sp9（Sp9 転写因子）は、GC ボックスに結合する Sp/KLF ファミリーのタンパク質の一員であり、胚発生における細胞運命決定を制御する遺伝子発現プログラムを調節する。マウスでは、Sp9 の活性は中枢神経系および四肢におけるパターニングや分化過程と関連づけられており、前駆細胞の増殖や組織形態形成に影響する転写ネットワークを協調的に制御する。核内の DNA 結合性調節因子として、Sp9 は、エンハンサーおよびプロモーターの構造に収束して系譜特異的な転写を微調整する経路を含む、より広範な発生シグナルの文脈とも連携する。発生期の転写因子機能の破綻は先天性表現型や神経発達異常としばしば関連するため、Sp9 は遺伝子制御回路の機構的研究に有用な標的である。

Sp9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSp9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sp9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sp9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sp9タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sp9シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sp9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sp9の機能に不可欠なSp9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sp9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sp9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSp9 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sp9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sp9 HDRプラスミド（m）および Sp9 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSp9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSp9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。