SP140 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409816

Panoramica

SP140 codifica una proteina nucleare associata alla cromatina, espressa prevalentemente nelle linee ematopoietiche e immunitarie, dove contribuisce alla regolazione trascrizionale e al controllo dello stato cellulare. In quanto membro della famiglia SP100/SP140 contenente moduli SAND, PHD e simili al bromodominio, SP140 è collegata al riconoscimento di caratteristiche della cromatina e all’assemblaggio di complessi regolatori che modulano programmi infiammatori e di differenziamento. È stata implicata in vie di segnalazione dell’immunità innata e adattativa, inclusa la modulazione di risposte trascrizionali guidate da citochine e degli stati di attivazione dei macrofagi. Studi genetici e funzionali associano un’attività alterata di SP140 a disturbi immunomediati, rendendola un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di regolazione dei geni immunitari e il controllo epigenetico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SP140 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SP140 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SP140 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SP140 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SP140.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SP140 per lo studio della segnalazione di SP140, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SP140 critici per la funzione di SP140
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SP140 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SP140 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SP140 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SP140. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SP140 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SP140 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SP140 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SP140 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.