SP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422901

概要

Sftpb は、肺胞II型上皮細胞における肺サーファクタントの組み立てと機能に必須な、疎水性の分泌タンパク質であるサーファクタントプロテインB（SP-B）をコードする。SP-B は、気液界面でのリン脂質の吸着と膜の安定性を促進し、肺胞のコンプライアンスおよび効率的なガス交換を支える。SP-B のプロセシングと輸送は、ラメラ小体の生合成および制御された分泌経路と密接に連動しており、SP-B が障害されると、末梢肺におけるサーファクタント恒常性や細胞ストレス応答が攪乱される。Sftpb の発現や機能の変化は、マウスモデルにおいてサーファクタント機能不全や肺損傷表現型の機序を研究するための分子学的な手がかりとして広く用いられている。

SP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSftpb遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sftpb内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sftpbのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SP-Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SP-Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sftpb欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SP-Bの機能に不可欠なSftpbエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sftpbゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSP-B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sftpb遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SP-B HDRプラスミド（m）および SP-B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSftpbホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSftpb標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。