Sox-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401473-ACT

SOX1 kodiert den Transkriptionsfaktor Sox-1, ein DNA-bindendes Protein der High-Mobility-Group-(HMG)-Box, das eine zentrale Rolle bei der frühen Spezifizierung des Neuroektoderms und der Aufrechterhaltung der Identität neuronaler Vorläuferzellen spielt. Sox-1 reguliert transkriptionelle Programme, die die Festlegung des Zellschicksals, das Timing der Differenzierung und die Musterbildung des Neuralrohrs steuern, und wirkt dabei innerhalb übergeordneter entwicklungsbiologischer Signalnetzwerke, die Schnittstellen zu den Wnt-, Notch- und Shh-Signalwegen aufweisen. In der Humanbiologie sind veränderte SOX1-Expression und zugehörige Linienprogramme relevant für Studien zu neuroentwicklungsbezogenen Fehlregulationen und zu kontextspezifischer transkriptioneller Reprogrammierung, wie sie bei Krebsarten mit stammzellähnlichen Eigenschaften beobachtet wird. Als Linienmarker und Regulator wird SOX1 широко eingesetzt, um neuronale Differenzierungsverläufe zu modellieren und genregulatorische Netzwerke in Stamm- und Vorläuferzellsystemen zu untersuchen.

Sox-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sox-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sox-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sox-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sox-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.