Plásmido Doble Nickase (h) SNX3: sc-404028-NIC

SNX3 (sorting nexin 3) es una sorting nexin con dominio PX que se une al fosfatidilinositol 3‑fosfato en endosomas tempranos y ayuda a organizar la clasificación de la carga a través del sistema endosomal. Es un componente clave del tráfico asociado al retromer, ya que favorece la recuperación de endosoma a Golgi y el reciclaje regulado de proteínas de membrana, moldeando así la disponibilidad de receptores y la señalización posterior. A través de sus funciones en la remodelación de membranas y la selección de carga, SNX3 influye en procesos como la captación de nutrientes, la atenuación de señales y el mantenimiento de la polaridad celular. Las vías de tráfico endosomal desreguladas en las que participan SNX3 y la función del retromer se estudian con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración, la entrada de patógenos y la alteración de la señalización de receptores observada en múltiples modelos de enfermedad.

SNX3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SNX3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SNX3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SNX3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SNX3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.