Plásmido CRISPR de Activación (h) SNRK: sc-407320-ACT

La quinasa relacionada con sucrosa no fermentable (SNRK) es una quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas relacionadas con AMPK que integra el estado energético celular con programas metabólicos y de adaptación al estrés. SNRK se ha vinculado con la regulación de la función mitocondrial, el metabolismo de lípidos y glucosa y la señalización inflamatoria, con funciones descritas en la biología endotelial y cardíaca, así como en la homeostasis del tejido adiposo. Mediante un control dependiente de la fosforilación de efectores aguas abajo, SNRK interactúa con vías que regulan la detección de nutrientes, las respuestas al estrés oxidativo y la remodelación celular. La actividad o expresión alterada de SNRK se ha asociado con fenotipos cardiometabólicos y mecanismos de enfermedad relacionados con la inflamación, lo que la convierte en una diana útil para analizar redes de señalización reguladas por la energía en células humanas.

SNRK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNRK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SNRK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNRK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNRK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SNRK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNRK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SNRK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SNRK en células tumorales con expresión de SNRK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.