Plasmide CRISPR d'Activation (h) SNFT: sc-403344-ACT

BATF3 code un facteur de transcription de type « basic leucine zipper » qui régule des programmes d’expression génique associés à la spécification des lignées immunitaires et à la transcription induite par des stimuli. Dans les cellules humaines, BATF3 participe à des réseaux transcriptionnels en aval de la signalisation des cytokines et des récepteurs de reconnaissance des motifs, influençant le traitement et la présentation des antigènes, les réponses associées aux interférons et, plus largement, les voies inflammatoires. La perturbation de programmes dépendants de BATF3 a été associée à une surveillance immunitaire altérée et à des états inflammatoires dérégulés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des interactions tumeur–système immunitaire et de l’immunopathologie liée aux infections. En tant que régulateur transcriptionnel, BATF3 est couramment étudié pour ses effets sur les décisions de destinée cellulaire, la régulation génique associée à la chromatine et les réponses dépendantes du contexte aux signaux du microenvironnement.

SNFT Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BATF3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNFT Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BATF3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BATF3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNFT. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BATF3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNFT au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNFT dans les cellules tumorales présentant une expression de BATF3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.