SNFT CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403344-ACT

BATF3 kodiert einen basischen Leucin-Zipper-Transkriptionsfaktor, der Genexpressionsprogramme reguliert, die mit der Spezifizierung von Immunzelllinien und stimulusabhängiger Transkription verknüpft sind. In menschlichen Zellen ist BATF3 an Transkriptionsnetzwerken beteiligt, die nachgeschaltet an Zytokin- und Mustererkennungs-Signalen wirken, und beeinflusst dabei die Antigenverarbeitung/-präsentation, interferonassoziierte Reaktionen sowie breitere Entzündungswege. Störungen BATF3-abhängiger Programme wurden mit veränderter Immunüberwachung und dysregulierten Entzündungszuständen in Verbindung gebracht, was BATF3 für Studien zu Tumor‑Immun‑Interaktionen und infektionsassoziierter Immunpathologie relevant macht. Als transkriptioneller Regulator wird BATF3 häufig im Hinblick auf seine Effekte auf Zellschicksalsentscheidungen, chromatinasoziierte Genregulation und kontextabhängige Reaktionen auf Signale aus dem Mikromilieu untersucht.

SNFT Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BATF3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNFT Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BATF3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BATF3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNFT-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BATF3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNFT-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNFT-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BATF3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.