Snapin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406317

概要

SNAPINは、SNARE機構やテザリング複合体と結合して小胞のドッキングおよび制御性エキソサイトーシスを支える、小型の細胞質タンパク質であるSnapinをコードしています。Snapinは、シナプス小胞のプライミング、カルシウムに連動した神経伝達物質放出、さらに膜融合イベントを協調させる相互作用を介したエンドソーム／リソソーム関連輸送に関与することが示されています。シナプス伝達と細胞内輸送に影響を与えることから、SNAPINは神経細胞の接続性、オートファジー・リソソーム機能、ストレス応答性シグナル伝達に関連する経路でしばしば研究されています。Snapin依存的な輸送の異常は、小胞輸送やプロテオスタシスが破綻する神経発達疾患および神経変性疾患の機序の文脈でも検討されてきました。

Snapin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSNAPIN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SNAPIN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SNAPINのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Snapinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Snapinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SNAPIN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Snapinの機能に不可欠なSNAPINエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SNAPINゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Snapin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSnapin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SNAPIN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Snapin HDRプラスミド（h）および Snapin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSNAPINホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSNAPIN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。