SMRTe CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401150-ACT

NCOR2 は、SMRTe（レチノイド受容体および甲状腺ホルモン受容体のサイレンシング・メディエーター）をコードしており、HDAC3 ならびに関連するクロマチン修飾因子を含む転写抑制複合体の足場となるコリプレッサーです。SMRTe は核内受容体および追加の転写因子と相互作用することで、クロマチンの凝縮と、状況依存的な遺伝子サイレンシングを、ホルモン応答性および発生関連の遺伝子プログラム全体にわたって協調的に制御します。この調節は、エンハンサーおよびプロモーターのアセチル化に広範な影響を及ぼすことを通じて、細胞運命決定、代謝恒常性、炎症シグナル伝達を制御する経路と交差します。NCOR2/SMRTe 活性の破綻は、がん生物学、内分泌関連の表現型、免疫介在性疾患メカニズムで観察される転写ネットワークの変化に関与すると示唆されており、遺伝子制御研究における機構的ハブとしての有用性を支持しています。

SMRTe CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NCOR2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMRTe CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NCOR2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNCOR2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMRTeの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNCOR2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMRTe依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNCOR2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMRTe経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。