SMPDL3B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430315

Visão geral

Smpdl3b codifica a esfingomielina fosfodiesterase ácida tipo 3B (SMPDL3B), uma fosfodiesterase associada à membrana implicada na regulação do metabolismo de esfingolipídios e fosfolipídios na superfície celular. A SMPDL3B tem sido associada à modulação da sinalização de receptores do tipo Toll, aos estados de ativação de macrófagos e ao controle homeostático das respostas inflamatórias por meio de efeitos sobre a composição lipídica da membrana e a organização de receptores. Na biologia imune e renal em camundongos, alterações na atividade de SMPDL3B foram associadas a mudanças na responsividade imune inata e na função de podócitos, conectando o remodelamento lipídico à lesão tecidual e à inflamação. Como resultado, Smpdl3b é frequentemente estudado em vias que interseccionam sinalização lipídica, tráfego endolisossomal e fenótipos de células imunes relevantes para modelos de doenças inflamatórias e metabólicas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SMPDL3B (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Smpdl3b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Smpdl3b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Smpdl3b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SMPDL3B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Smpdl3b para a investigação da sinalização de SMPDL3B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Smpdl3b críticos para a função SMPDL3B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Smpdl3b para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SMPDL3B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo SMPDL3B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Smpdl3b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SMPDL3B Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR SMPDL3B (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Smpdl3b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Smpdl3b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.