Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
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Plásmido CRISPR de Activación (m) SMPDL3B: sc-430315-ACT
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (m) SMPDL3B es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (m) SMPDL3B incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR SMPDL3B (m) y el plásmido de activación CRISPR SMPDL3B (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de Smpdl3b. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SMPDL3B Anticuerpo (H-3): sc-137113
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (m) SMPDL3B | sc-430315-ACT | 20 µg | $397.00 |
El gen murino **Smpdl3b** codifica la esfingomielina fosfodiesterasa 3B tipo ácida (SMPDL3B), una proteína tipo fosfodiesterasa asociada a la membrana implicada en la regulación del metabolismo de esfingolípidos y fosfolípidos en la superficie celular y en compartimentos endolisosomales. SMPDL3B se ha relacionado con la modulación de la señalización inmunitaria innata y la organización de microdominios de membrana, influyendo en procesos como el tráfico de receptores, el ajuste fino de vías inflamatorias y la dinámica del citoesqueleto. En células mieloides y células inmunitarias residentes en tejidos, una actividad alterada de SMPDL3B puede desplazar los umbrales de señalización dependientes de lípidos que determinan las respuestas a señales microbianas y al estrés tisular. La desregulación del manejo de lípidos y de la homeostasis inmunitaria convierte a **Smpdl3b** en una diana relevante para estudios mecanísticos de fenotipos asociados a la inflamación y del crosstalk metabólico‑inmunitario en modelos murinos.
SMPDL3B El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Smpdl3b sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
SMPDL3B El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Smpdl3b en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Smpdl3b, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMPDL3B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Smpdl3b y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMPDL3B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMPDL3B en células tumorales con expresión de Smpdl3b silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.