SMG5 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406989-LAC

SMG5 kodiert eine Kernkomponente der Maschinerie des nonsense-mediated mRNA decay (NMD), die die Überwachung und den Abbau von Transkripten mit vorzeitigen Terminationscodons fördert. SMG5 wirkt mit SMG6 und SMG7 stromabwärts der UPF1-Phosphorylierung zusammen, um Proteinphosphatase-Komplexe zu rekrutieren und die Dephosphorylierung von UPF1 zu erleichtern, wodurch translationelle Termination mit mRNA-Abbau gekoppelt wird. Über diese Funktion trägt SMG5 zur Aufrechterhaltung der RNA-Qualitätskontrolle bei, prägt die Homöostase des Transkriptoms und beeinflusst Reaktionen auf zellulären Stress sowie Differenzierungsprogramme. Dysreguliertes NMD und eine veränderte SMG5-Funktion wurden mit aberranten Genexpressionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die an der Krebsbiologie sowie an Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neurodegenerativer Erkrankungen beteiligt sind, was SMG5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen macht.

SMG5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SMG5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SMG5 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SMG5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SMG5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SMG5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.