SMG5 Double Nickase Plasmid (h): sc-406989-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SMG5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SMG5 Double-Nickase-Plasmid (h) und SMG5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SMG5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SMG5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406989-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SMG5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406989-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMG5 kodiert einen konservierten Kernfaktor des Nonsense-mediated mRNA Decay-(NMD)-Signalwegs, der dazu beiträgt, Transkripte mit vorzeitigen Terminationscodons zu eliminieren, und die Stabilität ausgewählter physiologischer mRNAs moduliert. SMG5 interagiert mit phosphoryliertem UPF1 und arbeitet mit PP2A-haltigen Komplexen zusammen, um die Dephosphorylierung von UPF1 zu fördern und so den Übergang von der Überwachung zur mRNA-Degradation zu koordinieren. Über diese Aktivitäten trägt SMG5 zur translationsabhängigen RNA-Qualitätskontrolle, zur Proteostase und zur Regulation von Genexpressionsprogrammen während zellulärer Stressantworten bei. Eine Dysregulation von NMD-Komponenten, einschließlich SMG5, wurde mit einer veränderten Transkriptom-Homöostase und Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Neuroentwicklungs- und Krebsbiologie relevant sind, was SMG5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der RNA-Überwachung macht.
SMG5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SMG5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SMG5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SMG5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SMG5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.