SMEK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412572

概要

PPP4R3Aは、プロテインホスファターゼ4（PP4）の調節サブユニットであるSMEK1をコードしており、特定の基質へホスファターゼ活性を誘導することで、リン酸化依存的なシグナル伝達を調節します。SMEK1は、チェックポイントシグナルや核内タンパク質の動態を形作るPP4媒介性の脱リン酸化を通じて、細胞周期進行、DNA損傷応答、ならびにクロマチン関連過程の制御に関与すると示唆されています。キナーゼとホスファターゼのバランスに影響することで、SMEK1はゲノム安定性、増殖、ストレス応答に関連する経路に作用し得ます。PPP4R3Aに関連する機能を含むPP4調節ネットワークの破綻は、異常なリン酸化やDNA修復不全が病態に寄与する、がん原性シグナル、複製ストレス、その他の疾患の研究において重要です。

SMEK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPP4R3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPP4R3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPP4R3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SMEK1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SMEK1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPP4R3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SMEK1の機能に不可欠なPPP4R3Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPP4R3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SMEK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSMEK1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPP4R3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SMEK1 HDRプラスミド（h）および SMEK1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPP4R3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPP4R3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。