SmcX Double Nickaseプラスミド (h): sc-405760-NIC

KDM5Cは、リジン脱メチル化酵素SmcXをコードしている。SmcXはJmjCドメインをもつ酵素で、H3K4me3/2マークを除去することで、神経発生、クロマチン構造の維持、細胞周期制御に関連する転写プログラムを調節する。SmcXはクロマチンリモデリングのネットワーク内で機能し、エンハンサーおよびプロモーター活性のエピジェネティックな制御とも連動して、DNA損傷応答や分化に伴う遺伝子発現などの経路に影響を与える。KDM5Cの発現異常や病的バリアントは、知的障害を含むX連鎖性の神経発達障害と関連しており、SmcX活性の変化は転写の不安定化やゲノム維持の観点からも研究されている。これらの特徴から、KDM5Cはヒト細胞モデルにおいて、遺伝子発現のエピジェネティック制御および疾患関連クロマチン状態を検討するための有用な標的となる。

SmcX ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KDM5C 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KDM5C内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KDM5Cの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KDM5Cが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。