Plasmide CRISPR d'Activation (m) Smchd1: sc-428851-ACT

Smchd1 (structural maintenance of chromosomes flexible hinge domain containing 1) est un régulateur épigénétique qui favorise l’organisation de la chromatine à haut niveau et la répression génique à longue distance dans les cellules de souris. La protéine SMCHD1 contribue à une répression stable de régions génomiques spécifiques, notamment d’éléments associés à l’inactivation du chromosome X et à d’autres programmes de silencement dépendants du contexte, ce qui la relie au contrôle transcriptionnel et à l’architecture de la chromatine. Par ses effets sur la méthylation de l’ADN, les paysages de modifications des histones et la compaction de la chromatine, Smchd1 influence la régulation des gènes au cours du développement et des états d’expression spécifiques de lignée. Un dérèglement de la répression dépendante de SMCHD1 a été associé à des états de chromatine altérés en lien avec des phénotypes du développement et des mécanismes de maladies neuromusculaires, ce qui en fait une cible utile pour des études de génomique fonctionnelle sur le contrôle épigénétique.

Smchd1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Smchd1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Smchd1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Smchd1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Smchd1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Smchd1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Smchd1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Smchd1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Smchd1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Smchd1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.