Plásmido CRISPR de Activación (h) SMC1: sc-403715-ACT

SMC1B codifica una subunidad de mantenimiento estructural de los cromosomas (SMC) asociada a la meiosis, que se asocia con componentes de cohesina para regular la cohesión de las cromátidas hermanas, la sinapsis cromosómica y la segregación precisa durante la gametogénesis. La organización de orden superior de la cromatina mediada por cohesina influye en el momento de la replicación del ADN y en las respuestas al daño del ADN, lo que vincula la actividad de la familia SMC con vías de estabilidad genómica y con la regulación transcripcional. La desregulación de la biología de la cohesina se ha implicado ampliamente en la aneuploidía, en mecanismos relacionados con la infertilidad y en cohesinopatías, y la alteración de la función de la cohesina también es relevante para la inestabilidad cromosómica asociada al cáncer. En modelos celulares humanos, la modulación de la expresión de SMC1B respalda estudios de arquitectura de la cromatina, procesos relacionados con la recombinación y control del ciclo celular.

SMC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMC1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SMC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMC1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMC1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SMC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMC1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SMC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SMC1 en células tumorales con expresión de SMC1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.