SMARCD2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403091-ACT

SMARCD2 (auch bekannt als BAF60B) kodiert eine zentrale akzessorische Untereinheit des ATP‑abhängigen SWI/SNF‑(BAF-)Chromatin-Remodeling-Komplexes, der dabei hilft, sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der Umpositionierung von Nukleosomen zu koppeln. Durch die Regulation der Chromatinzugänglichkeit beeinflusst SMARCD2 linienspezifische Transkriptionsprogramme, die die hämatopoetische Differenzierung, die Reifung von Immunzellen und die reizabhängige Genexpression steuern. Diese Chromatin-Remodeling-Aktivität integriert sich in Signalwege, die die Transkriptionsinitiation, die Enhancer-Funktion und die Aufrechterhaltung epigenetischer Zustände über Entwicklung hinweg sowie in Stressantworten regulieren. Eine veränderte Dosierung oder Funktion von SWI/SNF-Untereinheiten ist allgemein mit fehlregulierter Differenzierung und onkogener Transkriptionsschaltkreise verbunden, wodurch SMARCD2 ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur chromatingetriebenen Krankheitsbiologie darstellt.

SMARCD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SMARCD2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SMARCD2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SMARCD2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SMARCD2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SMARCD2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SMARCD2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SMARCD2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SMARCD2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SMARCD2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.