Plásmido CRISPR de Activación (h) Smad7: sc-400251-ACT

SMAD7 codifica Smad7, un SMAD inhibidor que actúa como un regulador negativo clave de la señalización de TGF-β y BMP al interferir con la fosforilación de los R-SMAD mediada por receptores y promover la disminución de los receptores. Mediante la modulación de programas transcripcionales dependientes de SMAD, Smad7 influye en la transición epitelio-mesenquimal, la remodelación de la matriz extracelular, el control del ciclo celular y la interacción con la señalización inflamatoria. La alteración de la expresión de SMAD7 se ha vinculado con respuestas fibróticas desreguladas, una homeostasis inmunitaria deteriorada y un control del crecimiento aberrante en múltiples contextos tisulares. Estas conexiones de vías hacen de SMAD7 un objetivo útil para analizar la regulación por retroalimentación dentro de las redes TGF-β/BMP y sus salidas transcripcionales aguas abajo.

Smad7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMAD7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Smad7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMAD7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMAD7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Smad7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMAD7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Smad7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Smad7 en células tumorales con expresión de SMAD7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.