Smad2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421525

概要

Smad2は、正規のTGF-β／Activin／Nodal経路における細胞内シグナル伝達因子をコードしており、I型受容体によってC末端がリン酸化されるR-SMADとして機能し、SMAD4と転写複合体を形成します。マウス細胞では、SMAD2は胚のパターニング、幹細胞の運命決定、上皮間葉転換（EMT）、細胞外マトリックスのリモデリング、免疫調節を制御する遺伝子プログラムを調節します。文脈依存的な転写制御を通じて、SMAD2は増殖・分化・アポトーシスに影響し、TGF-βスーパーファミリーリガンドからのシグナルを他のシグナル伝達ネットワークと統合します。SMAD2シグナルの破綻は、経路出力や標的遺伝子発現の変化を介して、線維化関連プロセス、炎症性表現型、腫瘍生物学に関与することが示唆されています。

Smad2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSmad2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Smad2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Smad2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Smad2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Smad2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Smad2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Smad2の機能に不可欠なSmad2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Smad2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Smad2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSmad2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Smad2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Smad2 HDRプラスミド（m）および Smad2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSmad2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSmad2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。