Sm D3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405302-ACT

SNRPD3 kodiert das humane Sm-D3-Kernprotein, eine konservierte Komponente des Sm-Rings, der sich an U-reiche snRNAs anlagert, um spliceosomale snRNPs zu bilden. Sm D3 unterstützt die Biogenese von snRNPs und die Genauigkeit des Prä‑mRNA-Spleißens – Prozesse, die eng mit Transkription, RNA-Qualitätskontrolle und Zellzyklusprogrammen gekoppelt sind. Störungen von Sm-Proteinen können die Wahl von Spleißstellen und das Gleichgewicht von Transkript-Isoformen beeinträchtigen und so zu einem breiten Stress der RNA-Prozessierung beitragen, wie er häufig in proliferativen und neuroentwicklungsbezogenen Kontexten beobachtet wird. SNRPD3 ist daher ein nützlicher Ausgangspunkt, um die Assemblierung des Spleißosoms, den snRNA-Stoffwechsel und die spleißabhängige Regulation von Genexpressionsnetzwerken zu untersuchen.

Sm D3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SNRPD3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sm D3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SNRPD3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SNRPD3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sm D3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SNRPD3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sm D3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sm D3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SNRPD3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.