Plásmido Doble Nickase (h) SLP-76: sc-401421-NIC

LCP2 codifica SLP-76, una proteína adaptadora citosólica que coordina la transducción de señales aguas abajo de los inmunorreceptores en células hematopoyéticas. Tras la activación del receptor de células T y de los receptores Fc, SLP-76 ensambla complejos multiproteicos con LAT, GADS, VAV1, ITK y PLCγ1 para propagar cascadas de fosforilación que impulsan el flujo de calcio, la activación de MAPK, la remodelación del citoesqueleto y la adhesión mediada por integrinas. A través de estas vías, SLP-76 regula la activación y el desarrollo de los linfocitos, así como la formación de la sinapsis inmunológica, lo que convierte a LCP2 en un nodo clave para estudiar la topología de las redes de señalización inmunitaria. La señalización dependiente de SLP-76 desregulada se ha implicado en fenotipos de disfunción inmunitaria y en respuestas inflamatorias alteradas, lo que respalda su relevancia en la investigación mecanística de la inmunopatología.

SLP-76 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LCP2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LCP2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LCP2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LCP2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.