Slit2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423021-ACT

マウス Slit2 は、発生期における軸索誘導、神経細胞の移動、正中線からの反発を制御するために Robo 受容体に結合することで最もよく知られている、分泌性のガイダンス因子をコードしています。神経系にとどまらず、SLIT2–ROBO シグナルは Rho ファミリー GTPase とそれに続くアクチン再構築経路を介して、細胞骨格ダイナミクス、細胞接着、方向性運動を調節します。Slit2 の活性は血管パターニングや免疫細胞のトラフィッキングにも関与するとされ、血管新生や組織リモデリングなどの過程との関連が示されています。SLIT2/ROBO シグナルの制御異常は、がんモデルにおける浸潤性や転移挙動の変化、ならびに異常な神経発達表現型と関連づけられており、ガイダンスと移動の機構研究における重要性が支持されています。

Slit2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Slit2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Slit2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Slit2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSlit2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Slit2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSlit2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSlit2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSlit2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSlit2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。