Slit2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401586-ACT

ヒトSLIT2は、分泌性で細胞外マトリックスに関連するガイダンス因子であるSlit2をコードしており、ROBO受容体との相互作用を介して軸索誘導や神経細胞移動を制御する因子として最もよく知られています。神経系以外でも、Slit2は細胞骨格ダイナミクスや低分子GTPaseシグナル伝達を調節することで、細胞極性、接着、方向性運動に影響し、血管新生や組織リモデリングなどの過程と関連します。SLIT2の発現変化や経路ネットワークの改変は、発生シグナルの破綻や、がんにおける浸潤・転移生物学の変化など、複数の疾患関連状況で報告されています。これらの特性により、SLIT2はヒト細胞モデルにおいて、細胞間シグナル伝達、微小環境による制御、ならびに遊走表現型を研究するための有用な結節点となります。

Slit2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLIT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Slit2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLIT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLIT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Slit2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLIT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSlit2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLIT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSlit2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。