SLIRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418350

Übersicht

SLIRP (SRA stem-loop interacting RNA binding protein) ist ein kleines mitochondriales RNA-bindendes Protein, das mit LRPPRC assoziiert und die Stabilisierung sowie die koordinierte posttranskriptionelle Verarbeitung mitochondrienkodierter mRNAs unterstützt. Indem SLIRP die Homöostase mitochondrialer Transkripte aufrechterhält, trägt es zur Kapazität der oxidativen Phosphorylierung (OXPHOS) und zur Funktion der Atmungskette bei und beeinflusst damit den zellulären Energiestoffwechsel und mitochondriale Stressantworten. Eine Störung von SLIRP kann mitochondriale Genexpressionsprogramme beeinträchtigen und wurde mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, die für neuromuskuläre und metabolische Krankheitsmechanismen relevant sind. SLIRP wird daher in Signal- und Regulationswegen untersucht, die mitochondriale RNA-Regulation, Proteostase und bioenergetische Anpassung verknüpfen.

Das SLIRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLIRP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLIRP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLIRP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLIRP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLIRP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLIRP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLIRP-Exone abzielen, die für die SLIRP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLIRP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLIRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SLIRP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLIRP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLIRP HDR-Plasmid (h) und SLIRP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLIRP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLIRP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.