Slfn5 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-435875-ACT

Slfn5 (schlafen 5) ist ein Protein der Schlafen-Familie in der Maus, das an der Regulation der angeborenen Immun-Signalübertragung und interferon-stimulierten Transkriptionsprogrammen beteiligt ist. Schlafen-Proteine werden häufig mit der Kontrolle des Fortschreitens des Zellzyklus, dem RNA-Stoffwechsel und der Modulation der Differenzierung von Immunzellen in Verbindung gebracht; damit ist Slfn5 an Signalwege gekoppelt, die Entzündungsreaktionen und zelluläre Proliferationszustände prägen. Eine veränderte Schlafen-Aktivität wurde mit fehlregulierter Zytokin-Signalgebung und Tumor–Immun-Interaktionen in Zusammenhang gebracht, wodurch Slfn5 einen nützlichen molekularen Ansatzpunkt für die Untersuchung der Immunregulation in Krebs- und Entzündungskrankheitsmodellen darstellt. In Maus-Systemen bietet Slfn5 einen gut untersuchbaren Knotenpunkt, um interferongetriebene Gen-Netzwerke, Dynamiken von transkriptioneller Repression/Aktivierung und kontextabhängige Effekte auf das Zellwachstum zu analysieren.

Slfn5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Slfn5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Slfn5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Slfn5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Slfn5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Slfn5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Slfn5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Slfn5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Slfn5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Slfn5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.