Slfn12 Double Nickase Plasmid (h): sc-404339-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Slfn12 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Slfn12 Double-Nickase-Plasmid (h) und Slfn12 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLFN12 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Slfn12 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404339-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Slfn12 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404339-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes SLFN12 kodiert das Schlafen-Familienmitglied 12 (Slfn12), ein zytosolisches Protein, das an der Regulation der zellulären Differenzierung und der posttranskriptionellen Kontrolle der Genexpression beteiligt ist. SLFN-Proteine werden allgemein mit der Modulation des RNA-Stoffwechsels und translationaler Programme in Verbindung gebracht, die Proliferation und stressadaptive Antworten prägen, wodurch SLFN12 an der Schnittstelle von Wachstumskontrolle und Zellzustandsübergängen positioniert ist. Veränderte SLFN12-Aktivität und Expressionsmuster wurden in Zusammenhängen untersucht, in denen Differenzierung und Zellzyklus-Gleichgewicht gestört sind, was seine Relevanz für mechanistische Studien zu dysreguliertem Wachstum und gestörter Linienfestlegung in krankheitsassoziierten Modellen unterstreicht. Als Teil des umfassenderen, interferon-responsiven Schlafen-Netzwerks wird SLFN12 zudem genutzt, um zu untersuchen, wie angeborene Immun-Signalgebung mit der grundlegenden Kontrolle der Genexpression zusammenwirkt.
Slfn12 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLFN12-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLFN12 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLFN12-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLFN12-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.