Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLC5A8: sc-403705-ACT

SLC5A8 (également appelé SMCT1) code un transporteur de monocarboxylates couplé au sodium, qui assure l’absorption des acides gras à chaîne courte et d’autres monocarboxylates tels que le lactate, le pyruvate et le nicotinate à travers la membrane plasmique. En régulant la disponibilité intracellulaire de ces métabolites, SLC5A8 établit un lien entre le transport membranaire, le métabolisme énergétique cellulaire et le contrôle épigénétique, notamment via des voies influencées par des acides gras à chaîne courte inhibiteurs des histones désacétylases. Son expression est fréquemment modifiée en biologie du cancer et dans des modèles de cellules épithéliales, où l’activité du transporteur peut affecter la reprogrammation métabolique, les programmes de différenciation et les réponses au stress. SLC5A8 est également pertinent pour les études de la détection des nutriments et de la physiologie des tissus barrières, compte tenu de son rôle dans la gestion des monocarboxylates présents dans la lumière.

SLC5A8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC5A8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC5A8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC5A8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC5A8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC5A8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC5A8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC5A8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC5A8 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC5A8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.