SLC35D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407065

概要

SLC35D1 は、ゴルジ体に局在するヌクレオチド糖トランスポーターをコードしており、UDP-グルクロン酸および UDP-N-アセチルガラクトサミンをゴルジ体内腔へ取り込むことで、グリコサミノグリカン生合成を支えます。糖転移酵素に供給される基質量を調節することにより、SLC35D1 はプロテオグリカンの組み立て、細胞外マトリックスの構築、ならびに軟骨の発生に影響を与えます。SLC35D1 の機能破綻は、コンドロイチン硫酸産生の低下やプロテオグリカン組成の変化と整合する骨格異形成の表現型と関連しています。そのため、SLC35D1 はゴルジ体での糖鎖修飾、マトリックス生物学、そして軟骨細胞を含む結合組織系譜の分化に関わる経路の研究で頻繁に取り上げられます。

SLC35D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC35D1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC35D1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC35D1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SLC35D1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SLC35D1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC35D1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SLC35D1の機能に不可欠なSLC35D1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC35D1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SLC35D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSLC35D1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC35D1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SLC35D1 HDRプラスミド（h）および SLC35D1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC35D1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC35D1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。