Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLC35B4: sc-413728-ACT

SLC35B4 code un transporteur de sucres nucléotidiques associé à l’appareil de Golgi et au réticulum endoplasmique (RE), qui assure l’import de l’UDP‑xylose et de l’UDP‑N‑acétylglucosamine dans la voie sécrétoire, fournissant ainsi les substrats nécessaires aux réactions de glycosylation. En régulant la disponibilité des sucres nucléotidiques, SLC35B4 influence l’assemblage des glycannes sur les protéines et les lipides, modulant le trafic membranaire, la signalisation des récepteurs et les interactions avec la matrice extracellulaire. Des altérations du transport des sucres nucléotidiques et des états de glycosylation qui en découlent sont associées à l’adaptation métabolique et aux réponses au stress, faisant de SLC35B4 un point d’entrée pertinent pour étudier le glycométabolisme et l’homéostasie de la voie sécrétoire. Des programmes de glycosylation dérégulés ont été impliqués dans de nombreux aspects de la biologie du cancer et des phénotypes inflammatoires, ce qui soutient l’étude de SLC35B4 dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

SLC35B4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC35B4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC35B4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC35B4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC35B4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC35B4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC35B4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC35B4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC35B4 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC35B4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.