SLC35B4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413728-ACT

SLC35B4は、ゴルジ体／小胞体に局在するヌクレオチド糖トランスポーターをコードし、分泌経路へのUDP-キシロースおよびUDP-N-アセチルグルコサミンの取り込みを仲介して、糖鎖付加反応に必要な基質を供給します。ヌクレオチド糖の利用可能性を制御することにより、SLC35B4はタンパク質や脂質上の糖鎖の組み立てに影響を与え、膜輸送、受容体シグナル伝達、細胞外マトリックスとの相互作用を形作ります。ヌクレオチド糖輸送の変化と、それに続く糖鎖修飾状態の変動は、代謝適応やストレス応答と関連しており、SLC35B4は糖鎖代謝と分泌経路の恒常性を研究するうえで有用な結節点となります。糖鎖修飾プログラムの破綻は、がん生物学や炎症性表現型の広い領域で関与が示されており、疾患関連の細胞モデルにおけるSLC35B4の検討を支持します。

SLC35B4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC35B4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SLC35B4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC35B4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC35B4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SLC35B4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC35B4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSLC35B4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC35B4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSLC35B4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。