SLC35A5 Double Nickase Plasmid (h): sc-409546-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SLC35A5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SLC35A5 Double-Nickase-Plasmid (h) und SLC35A5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC35A5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SLC35A5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-409546-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35A5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409546-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35A5 kodiert einen vorhergesagten Nukleotid-Zucker-Transporter aus der Solute-Carrier-Familie, der im sekretorischen Weg lokalisiert ist und die Glykosylierung unterstützt, indem er aktivierte Zucker-Donoren zu luminalen Glykosyltransferasen transportiert. Indem SLC35A5 die Verfügbarkeit von Nukleotid-Zuckern im endoplasmatischen Retikulum und im Golgi-Apparat beeinflusst, kann es den Aufbau von Glykanen auf Membran- und sezernierten Proteinen modulieren – mit nachgeschalteten Effekten auf Proteinfaltung, Transport (Trafficking) und Zell‑Zell‑Interaktionen. Veränderte Glykosylierung ist ein häufiges Merkmal von Entwicklungs- und neurologischen Erkrankungen sowie von krebsassoziierten Phänotypen, was SLC35A5 für die Untersuchung relevant macht, wie der Transport von Nukleotid-Zuckern die zelluläre Homöostase prägt. Zu den Forschungsanwendungen gehören die Aufklärung organell-spezifischer Glykosylierungswege, das Kartieren glycoproteomischer Veränderungen sowie die Bewertung von Auswirkungen auf Sekretion und Rezeptorreifung in humanen Zellmodellen.
SLC35A5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC35A5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC35A5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC35A5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC35A5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.